糖基化对于生物制品的疗效、稳定性和免疫原性具有重要的影响。其中，寡糖谱和糖链结构是评估生物制品特性的重要指标。寡糖作为一种重要的碳水化合物，参与多种细胞生命过程，如蛋白质折叠和信号转导。此外，寡糖常与蛋白质结合形成糖蛋白。糖蛋白常位于细胞表面，参与细菌和病毒的识别，以及与凝集素等其他蛋白质的相互作用，对于生物制品正常功能的实现至关重要。

寡糖的合成不是通过模板的方式进行的，并且呈现出树状结构，这增加了寡糖结构解析的难度。为此，百泰派克生物科技BTP开发了一系列稳定、高效的液相色谱高分辨质谱（LC-MS/MS）表征方法。这些方法涵盖了从糖链分析、糖基化位点鉴定，到糖肽解析的完整分析流程。通过这些方法，我们能够有效地研究和解析寡糖的结构和功能特性，从而更好地理解糖基化对生物制品的影响。糖基化分析基本流程图如下所示：

图1 糖基化分析流程图

基本原理

寡糖链的分析通常借助液质联用的高分辨质谱平台。首先，使用PNGase F糖苷酶将糖链从糖蛋白上水解。随后，采用2-AB试剂对水解后的糖链进行衍生化标记。标记完成后，将糖链样品注入液相色谱高分辨质谱平台，进行数据采集。通过糖链分析软件，对采集到的质谱原始数据进行结构解析。

在分析过程中，液相色谱设备配备了荧光检测器，可用于糖链的定量。同时，串联的高分辨质谱系统用于对糖链结构进行解析和鉴定。这些分析方法结合了质谱和色谱技术，能够有效地揭示寡糖链的结构和特性。

图2 实验流程

实验仪器

HILIC-UHPLC/AB SCIEX 5600+

实验结果展示

基于HILIC-UHPLC-MS/MS的N糖分析是目前主流的分析方法。亲水相互作用色谱法（HILIC）被用于N糖的分离。通过PNGase F酶的反应，N糖被释放出来。随后，利用2-ānjīběn甲酰胺（2-AB）对释放的糖链进行衍生化。这种衍生化使得大量样本的N糖得以分析。衍生化后的N糖通过HILIC-UHPLC-MS进行检测。最后，通过使用专门的软件进行全自动结构解析，得到检测结果。这种方法能够高效地进行N糖的分析，为研究N糖的结构和特性提供了有效的手段。得到的N糖糖型及糖链结构解析结果如下展示：

图3 样品的N糖糖型

图4 样品的N糖糖型对应的糖链结构

*以上为质谱数据经过软件解析得到的糖型及糖链结构。

常见问题

问题1：寡糖结构的常用表示方式是什么？

回答：寡糖结构的常用表示方式为：

问题2：荧光检测器和质谱的作用分别是什么？

回答：荧光检测器主要用于检测荧光信号的强度，可用于定量分析。在糖基化分析中，荧光检测器通常用于定量测定糖链的含量，因为糖链经过衍生化标记后，具有荧光特性，荧光信号的强度与糖链的含量成正比。

质谱主要用于测定分子的质量和结构信息。在糖基化分析中，质谱可用于确定糖型，即分析糖链的组成和序列，以及确定修饰位点和修饰效率。通过质谱技术，可以获取糖链的质量信息，如分子量、碳水化合物的组成以及修饰的位置等重要参数。

荧光检测器和质谱在糖基化分析中通常是同时采集的。荧光检测器提供了定量测定糖链含量的信息，而质谱提供了糖型的结构信息。综合利用这两种技术，可以确定糖蛋白的糖型和比例，从而更全面地了解糖基化的特征和影响。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

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